现将经修订的 2005 年版《中国药典》三部收藏的 “ 流感全病毒灭活疫苗 ” 和拟载入 2005 年版药典第一增补版的 “ 流感病毒裂解疫苗 ” 国家标准修订稿公示如下，各有关单位如有修订意见或建议，请尽快与我会联系。公示截止日期为 2007 年 2 月 10 日。

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电子邮箱： hongxx@chp.org.cn

国家药典委员会

2007.01.17

附件： 1 、“ 流感全病毒灭活疫苗 ” 国家标准修订稿及修订对照表

2 、 “ 流感病毒裂解疫苗 ” 国家标准修订稿

附件 1

流感全病毒灭活疫苗

Liugan Quanbingdu Miehuoyimiao

Influenza Vaccine （ Whole Virion ） , Inactivated

本品系用世界卫生组织（ WHO ） 推荐的并经国家食品药品监督管理局批准的流感病毒株分别接种鸡胚， 经培养、收获病毒液，病毒灭活、浓缩和纯化后制成。用于预防本型病毒引起的流行性感冒。

1 基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合 “凡例”有关要求。

2 制造

2.1 生产用鸡胚

毒种传代和制备用鸡胚应来源于 SPF 鸡群。疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用 9~11 日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。

2.2 毒种

2.2.1 名称和来源

生产用毒种为 WHO 推荐并经批准的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为 WHO 当年推荐的病毒株或相似株。

2.2.2 种子批的建立

应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。以 WHO 推荐并提供的流感毒株代次为基础，至成品疫苗中病毒传代不得超过 5 代。

2.2.3 种子批检定

主种子批应做以下全面检定，工作种子批应至少进行 2.2.3 .1-2.2.3.5 项 检定。

2.2.3 .1 鉴别试验

血凝素型别鉴定：应用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。

2.2.3 .2 病毒滴度

应用鸡胚半数感染剂量法（ EID 50 ）检查，病毒滴度应不低于 6.5LgEID 50 /ml 。

2.2.3 .3 血凝滴度

采用血凝法检测，血凝滴度应不低于 1 ： 160 。

2.2.3 .4 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

2.2.3 .5 支原体检查

依法检查（附录 XII B ），应符合规定。

2.2.3 .6 外源性禽白血病病毒检测

用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和病毒后，接种 SPF 鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。

2.2.3 .7 外源性禽腺病毒检测

用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和病毒后，接种 SPF 鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的 I 型和 III 型禽腺病毒，结果均应阴性。

2.2.4 毒种保存

冻干毒种应于－ 20 ℃ 以下保存，液体毒种应于－ 60 ℃ 以下保存。

2.3 单价病毒原液

2.3.1 病毒接种和培养

于鸡胚尿囊腔接种经适当稀释的工作种子批毒种， 置 33 ～ 35 o C 培养 48~72 小时。一次未使用完的工作种子批毒种，不得再回冻继续使用。

2.3.2 病毒收获

筛选活鸡胚， 置 2~8 o C 一定时间冷胚后，收获尿囊液于容器内，每个容器内应进行相应检测， 无菌检查应符合规定，血凝滴度应不低于 1 ： 160 。

2.3.3 合并

单型毒种的单次收获物可合并为单价病毒合并液。

2.3.4 病毒灭活

单价病毒合并液中加入适宜浓度的甲醛溶液， 置适宜的温度下进行病毒灭活， 灭活到期后取样进行病毒灭活验证试验。

2.3.5 浓缩及纯化

2.3.5 .1 浓缩

超滤浓缩灭活后的单价病毒合并液， 浓缩后的病毒液血凝效价应不低于 1 ： 10240 。

2.3.5 .2 纯化

超滤浓缩后的单价病毒合并液可采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法进行纯化， 采用后一种方法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖。

2.3.6 除菌过滤

纯化后的病毒液经除菌过滤后，即为单价病毒原液。

2.3.9 保存

于 2 ～ 8 ℃保存。

2.3.10 单价病毒原液检定

按 3.1 项进行。

2.4 半成品

2.4.1 配制

根据各单价病毒原液血凝素含量， 分别按比例混合配制， 使半成品中各型毒株的血凝素最终含量为 30 μ g/ml ，加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为半成品。

2.4.2 半成品检定

按 3.2 项进行。

2.5 成品

2.5.1 分批

应符合 “生物制品分批规程”规定。

2.5.2 分装

应符合 “生物制品分装和冻干规程”规定。

2.5.3 规格

每瓶 0.5ml 、 1.0ml 。每 1 次人用剂量为 0.5ml 、 1.0ml ， 含各型流感病毒株血凝素应为 15 μ g 。

2.5.4 包装

应符合 “生物制品包装规程”规定 。

3 检定

3.1 单价病毒原液的检定

3.1.1 鉴别试验

用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验或单向免疫扩散试验（方法见 3.1.3 项）， 结果应证明抗原性与推荐流感病毒株相一致。

3.1.2 病毒灭活验证试验

将单价病毒原液原倍及 10 － 1 、 10 － 2 倍稀释的病毒液分组接种鸡胚尿囊腔，每组接种 10 个 9~11 日龄鸡胚，每胚接种 0.2ml ，置 33-35 o C 培养 72 小时。 24 小时内死亡的不计数， 每组鸡胚须至少存活 80% 。自存活的鸡胚中每胚取 0.5ml 尿囊液， 按组混合后， 再盲传一代，每组各接种 10 个胚，每胚接种 0.2ml ，经 33-35 o C 培育 72 小时后，取尿囊液进行血凝试验，结果应不出现血凝反应。（该项检定亦可在单价病毒合并液灭活后进行）

3.1.3 血凝素含量

采用单向免疫扩散试验检测血凝素含量。

将抗原参考品和原液分别加入到含有标准参考品抗体的 1.5% 琼脂糖凝胶板上， 孔径为 3mm ，每孔 10 μ l ， 于 20 -25 ℃ 放置至少18 个小时。用 PBS 浸泡 1 小时后， 干燥、染色、脱色。准确测量抗原参考品和原液形成的沉淀环的直径， 以抗原参考品形成的沉淀环的直径对其相应抗原浓度进行直线回归， 求出直线回归方程， 代入原液的沉淀环直径， 即可得到原液的血凝素含量， 应不低于 90 μ g/ （株﹒ ml ）。

3.1.4 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.2 半成品检定

3.2.1 血凝素含量

按 3.1.3 项进行，血凝素含量应为 24~36 μ g/ （株﹒ ml ）。

3.2.3 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.3 成品检定

3.3.1 鉴别试验

用相应（亚）型特异性免疫血清进行单向免疫扩散试验，结果应证明抗原性与推荐病毒株相一致。

3.3.2 外观

应为微乳白色液体，无异物。

3.3.3 装量

按附录 I A 中装量项进行， 应不低于标示量。

3.3.4 p H 值

应为 6.8 ～ 8.0 （附录 V A ）。

3.3.5 游离甲醛含量

应不高于 50 μ g/ 剂（附录 VI L ） 。

3.3.6 硫柳汞含量

应不高于 50 μ g/ 剂（附录 VII B ）。

3.3.7 血凝素含量

按 3.1.3 项进行，血凝素含量应为 24~36 μ g/ 株 /ml 。

3.3.8 总蛋白质含量

应不高于 300 μ g/ 剂；并不得超过疫苗中血凝素总含量的 6 倍（附录 VI B 第二法）。

3.3.9 卵清蛋白含量

采用酶联免疫法（仲裁方法）或对流免疫电泳方法检测， 卵清蛋白含量应不高于 1000ng / 剂。

3.3.10 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.3.11 异常毒性检查

依法检查（附录 XII F ），应符合规定 。

3.3.12 细菌内毒素含量

应小于 50EU/ 剂（附录 XII E 凝胶限量试验）。

4 保存、运输和效期

于 2-8 o C 避光保存和运输。自血凝素含量检定合格之日起， 有效期为 12 个月。

5 说明书

流感全病毒灭活疫苗说明书

【药品名称】

通用名称：流感全病毒灭活疫苗

英文名称： Influenza Vaccine （ Whole Virion ）， Inactivated

汉语拼音： Liugan Quanbingdu Miehuoyimiao

【成份和性状】

本品系用世界卫生组织（ WHO ） 推荐的并经国家食品药品监督管理局批准的 流感病毒株，分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液， 病毒灭活、浓缩和纯化后制成。为微乳白色液体，含硫柳汞防腐剂。

【接种对象】

12 岁以上儿童、成人及老年人。

【作用和用途】

接种本疫苗后，可刺激机体产生抗流感病毒的免疫力。用于预防本型流感病毒引起的流感。

【规格】

每瓶 0.5ml 、 1.0ml 。每 1 次人用剂量为 0.5ml 、 1.0ml ， 含各型流感病毒株血凝素应为 15 μ g 。

【免疫程序和剂量】

于上臂外测三角肌肌内注射， 注射剂量为 0.5ml 或 1.0ml 。

【不良反应】

少数人可出现中、低度发热，或注射部位出现轻微红肿、微痛，短期内可自行消失。

【禁忌】

1. 发热、患急性疾病及感冒者。

2. 慢性疾病急性发作者。

3. 有格林巴利综合征病史者。

4. 对鸡蛋过敏或有其他过敏史者。

5. 妊娠期妇女。

【注意事项】

1. 严禁静脉注射。

2. 注射后出现任何神经系统反应者，禁止再次使用。

3. 疫苗中有异物或有摇不散的沉淀、疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。

4. 应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应现场休息片刻。

5. 严禁冻结。

【贮藏】

于 2 ~ 8 ℃ 避光保存和运输。

【包装】

按批准的执行。

【有效期】

12 个月。

【执行标准】

【批准文号】

【生产企业】

企业名称：

生产地址：

邮政编码：

电话号码：

传真号码：

网址：

2005 年版《中国药典》三部“流感全病毒灭活疫苗”

修订内容对照表

流感全病毒灭活疫苗

2000 年版《中国药典》三部

流感全病毒灭活疫苗

（修订后）

2. 种子批的建立

各种子批传代应不超过批准的代次

以 WHO 推荐并提供的流感毒株代次为基础， 至成品疫苗中病毒传代不得超过 5 代。

3. 种子批检定

(1) 病毒滴度

无规定

应用鸡胚半数感染剂量法（ EID50 ）检查， 病毒滴度应不低于 6.5Lg EID50 /ml 。

（ 2 ） 血凝滴度

应不低于 1 ： 120

每个收获容器内取尿囊液样品进行无菌和血凝滴度检测 , 无菌检查应符合规定 , 血凝滴度应不低于 1:160 。

5 ． 半成品配制

根据各单价病毒原液血凝素滴度 , 分别按比例混合后 , 进行适当稀释 , 加入硫柳汞作为防腐剂 , 即为疫苗半成品

根据各单价病毒原液血凝素含量， 分别按比例混合配制， 使半成品中各型毒株的血凝素最终含量为 30ug/ml ，加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为半成品

6. 半成品检定

1 ） 血凝素含量

应不低于 15 μ g/( 株 · 剂 )

应为 24-36 μ g/ （株 · ml ）

7. 成品检定

1 ） 血凝素含量

应不低于 15 μ g/( 株 · 剂 )

应为 24-36 μ g/ （株 · ml ）

3 ）细菌内毒素含量

应不高于 100EU/ 剂

应小于 50EU/ 剂

附件 2

流感病毒裂解疫苗

Liugan Bingdu Liejie Yimiao

Influenza Vaccine （ Split Virion ） , Inactivated

本品系用世界卫生组织（ WHO ） 推荐的并经国家食品药品监督管理局批准的流感病毒株分别接种鸡胚， 经培养、收获病毒液，病毒灭活、纯化、裂解后制成。用于预防本型病毒引起的流行性感冒。

1 基本要求

生产和检定用设施、原料及辅料、水、器具、动物等应符合 “凡例”有关要求。

2 制造

2.1 生产用鸡胚

毒种传代和制备用鸡胚应来源于 SPF 鸡群。疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用 9~11 日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。

2.2 毒种

2.2.1 名称和来源

生产用毒种为 WHO 推荐并经批准的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为 WHO 当年推荐的病毒株或相似株。

2.2.2 种子批的建立

应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。以 WHO 推荐并提供的流感毒株代次为基础，至成品疫苗中病毒传代不得超过 5 代。

2.2.3 种子批检定

主种子批应做以下全面检定，工作种子批应至少进行 2.2.3 .1-2.2.3.5 项 检定。

2.2.3 .1 鉴别试验

血凝素型别鉴定：应用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。

2.2.3 .2 病毒滴度

应用鸡胚半数感染剂量法（ EID 50 ）检查，病毒滴度应不低于 6.5LgEID 50 /ml 。

2.2.3 .3 血凝滴度

采用血凝法检测，血凝滴度应不低于 1 ： 160 。

2.2.3 .4 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

2.2.3 .5 支原体检查

依法检查（附录 XII B ），应符合规定。

2.2.3 .6 外源性禽白血病病毒检测

用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和病毒后，接种 SPF 鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。

2.2.3 .7 外源性禽腺病毒检测

用相应（亚）型的抗流感病毒血清中和病毒后，接种 SPF 鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的 I 型和 III 型禽腺病毒，结果均应阴性。

2.2.4 毒种保存

冻干毒种应于－ 20 ℃ 以下保存，液体毒种应于－ 60 ℃ 以下保存。

2.3 单价病毒原液

2.3.1 病毒接种和培养

于鸡胚尿囊腔接种经适当稀释的工作种子批毒种， 置 33 ～ 35 o C 培养 48~72 小时。一次未使用完的工作种子批毒种，不得再回冻继续使用。

2.3.2 病毒收获

筛选活鸡胚， 置 2~8 o C 一定时间冷胚后，收获尿囊液于容器内，每个容器内应进行相应检测， 无菌检查应符合规定，血凝滴度应不低于 1 ： 160 。

2.3.3 合并

单型毒种的单次收获物可合并为单价病毒合并液。

2.3.4 病毒灭活

单价病毒合并液中加入适宜浓度的甲醛溶液， 置适宜的温度下进行病毒灭活， 灭活到期后取样进行病毒灭活验证试验。（也可在纯化后或纯化过程中加入适宜浓度的甲醛溶液进行病毒灭活）。

2.3.5 浓缩及纯化

2.3.5 .1 超滤浓缩

采用离心或其他适宜的方法， 对灭活后的单价病毒合并液进行澄清， 并采用超滤法进行适当浓缩。

2.3.5 .2 纯化

超滤浓缩后的单价病毒合并液可采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法进行纯化， 采用后一种方法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖。

2.3.6 病毒裂解

纯化后的单价病毒合并液中加入适宜浓度的裂解剂，在适宜条件下进行病毒裂解。

2.3.7 超滤或再纯化

裂解后的病毒液可进行超滤或采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法进行再纯化，采用蔗糖密度梯度离心法进行再纯化的用超滤法去除蔗糖。

2.3.8 除菌过滤

纯化后的病毒裂解液经除菌过滤后，加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为单价病毒原液。

2.3.9 单价病毒原液检定

按 3.1 项进行。

2.3.10 保存

于 2 ～ 8 ℃保存。

2.4 半成品

2.4.1 配制

根据各单价病毒原液血凝素含量， 分别按比例混合配制， 使半成品中各型毒株的血凝素最终含量为 30 μ g/ml ，加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为半成品。

2.4.2 半成品检定

按 3.2 项进行。

2.5 成品

2.5.1 分批

应符合 “生物制品分批规程”规定。

2.5.2 分装

应符合 “生物制品分装和冻干规程”规定。

2.5.3 规格

本品为每瓶 （支） 0.25ml 或 0.5ml 。每 1 次人用剂量为 0.25ml （ 6 个月至 3 岁儿童用），含各流感病毒株血凝素应为 7.5 μ g ； 或 0.5ml （成人及 3 岁以上儿童），含各型流感病毒株血凝素应为 15 μ g 。

2.5.4 包装

应符合 “生物制品包装规程”规定 。

3 检定

3.1 单价病毒原液的检定

3.1.1 鉴别试验

用相应（亚）型特异性免疫血清进行血凝抑制试验或单向免疫扩散试验（方法见 3.1.3 项）， 结果应证明抗原性与推荐流感病毒株相一致。

3.1.2 病毒灭活验证试验

将单价病毒原液原倍及 10 － 1 、 10 － 2 倍稀释的病毒液分组接种鸡胚尿囊腔，每组接种 10 个 9~11 日龄鸡胚，每胚接种 0.2ml ，置 33-35 o C 培养 72 小时。 24 小时内死亡的不计数， 每组鸡胚须至少存活 80% 。自存活的鸡胚中每胚取 0.5ml 尿囊液， 按组混合后， 再盲传一代，每组各接种 10 个胚，每胚接种 0.2ml ，经 33-35 o C 培育 72 小时后，取尿囊液进行血凝试验，结果应不出现血凝反应。（该项检定亦可在单价病毒合并液灭活后进行）

3.1.3 血凝素含量

采用单向免疫扩散试验检测血凝素含量。

将抗原参考品和原液分别加入到含有标准参考品抗体的 1.5% 琼脂糖凝胶板上， 孔径为 3mm ，每孔 10 μ l ， 于 20 -25 ℃ 放置至少18 个小时。用 PBS 浸泡 1 小时后， 干燥、染色、脱色。准确测量抗原参考品和原液形成的沉淀环的直径， 以抗原参考品形成的沉淀环的直径对其相应抗原浓度进行直线回归， 求出直线回归方程， 代入原液的沉淀环直径， 即可得到原液的血凝素含量， 应不低于 90 μ g/ （株﹒ ml ）。

3.1.4 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.2 半成品检定

3.2.1 血凝素含量

按 3.1.3 项进行，血凝素含量应为 24~36 μ g/ （株﹒ ml ）。

3.2.2 裂解剂残留量

采用聚山梨酯 80 为裂解剂的， 其残留量应小于 80 μ g/ml ； 采用 Triton X-100 为裂解剂的， 其残留量应小于 300 μ g/ml ；采用 Triton X-N101 为裂解剂的， 其残留量应小于 100 μ g/ml 。

3.2.3 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.3 成品检定

3.3.1 鉴别试验

用相应（亚）型特异性免疫血清进行单向免疫扩散试验， 结果应证明抗原性与推荐病毒株相一致。

3.3.2 外观

应为微乳白色液体，无异物。

3.3.3 装量

按附录 I A 中装量项进行， 应不低于标示量。

3.3.4 p H 值

应为 6.5 ～ 8.0 （附录 V A ）。

3.3.5 游离甲醛含量

应不高于 100 μ g/ml （附录 VI L ） 。

3.3.6 硫柳汞含量

应不高于 100 μ g/ml （附录 VII B ）。

3.3.7 血凝素含量

按 3.1.3 项进行，血凝素含量应为 24~36 μ g/ 株 /ml 。

3.3.8 总蛋白质含量

应不高于 400 μ g/ml ；并不得超过疫苗中血凝素总含量的 5 倍（附录 VI B 第二法）。

3.3.9 卵清蛋白含量

采用酶联免疫法（仲裁方法）或对流免疫电泳方法检测， 卵清蛋白含量应不高于 2000ng /ml 。

3.3.10 无菌检查

依法检查（附录 XII A ），应符合规定。

3.3.11 异常毒性检查

依法检查（附录 XII F ），应符合规定 。

3.3.12 细菌内毒素含量

应小于 100EU/ml （附录 XII E 凝胶限量试验）。

4 保存、运输和效期

于 2-8 o C 避光保存和运输。自血凝素含量检定合格之日起， 有效期为 12 个月。

5 说明书

流感病毒裂解疫苗说明书

【药品名称】

通用名称：流感病毒裂解疫苗

英文名称： Influenza Vaccine （ Split Virion ）， Inactivated

汉语拼音： Liugan Bingdu Liejie Yimiao

【成份和性状】

本品系用世界卫生组织（ WHO ） 推荐的并经国家食品药品监督管理局批准的 流感病毒株，分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液， 病毒灭活、纯化、裂解后制成。为微乳白色液体，含硫柳汞防腐剂。

【接种对象】

易感者及易发生相关并发症的人群，如儿童、老年人、体弱者、流感流行地区人员等。

【作用和用途】

接种本疫苗后，可刺激机体产生抗流感病毒的免疫力。用于预防本型流感病毒引起的流感。

【规格】

每瓶（支） 0.25ml 或 0.5ml 。每 1 次人用剂量为 0.25ml （ 6 个月至 3 岁儿童用）， 含各流感病毒株血凝素应为 7.5 μ g ； 或 0.5ml （成人及 3 岁以上儿童）， 含各流感病毒株血凝素应为 15 μ g 。

【免疫程序和剂量】

（ 1 ）于上臂外侧三角肌肌内注射或皮下注射。

（ 2 ）于流感流行季节前或期间进行预防接种。成人及 3 岁以上儿童接种一针， 注射剂量为 0.5 ml ； 6 个月至 3 岁儿童接种两针，每针注射剂量为 0.25 ml ，间隔 2 ~ 4 周。

【不良反应】

少数人可出现中、低度发热，或注射部位出现轻微红肿、微痛，短期内可自行消失。

【禁忌】

1. 发热、患急性疾病及感冒者。

2. 慢性疾病急性发作者。

3. 有格林巴利综合征病史者。

4. 对鸡蛋过敏或有其他过敏史者。

5. 妊娠期妇女。

【注意事项】

1. 严禁静脉注射。

2. 注射后出现任何神经系统反应者，禁止再次使用。

3. 疫苗中有异物或有摇不散的沉淀、疫苗瓶有裂纹或标签不清者，均不得使用。

4. 应备有肾上腺素等药物，以备偶有发生严重过敏反应时急救用。接受注射者在注射后应现场休息片刻。

5. 严禁冻结。

【贮藏】

于 2 ~ 8 ℃ 避光保存和运输。

【包装】

按批准的执行。

【有效期】

12 个月。

【执行标准】

【批准文号】

【生产企业】

企业名称：

生产地址：

邮政编码：

电话号码：

传真号码：

网址：